ПЦР на гепатит С: качественный и количественный анализ крови и расшифровка результатов

До 1990-х годов для определения инфекционного гепатита С в медицинской литературе использовали термин «гепатит ни А, ни В с парентеральным механизмом заражения». Но в 1989 году был впервые выделен Hepatitis C virus (аббревиатура – HCV), однако достоверные методы диагностики, включая ПЦР на гепатит С, появились гораздо позже.

Полимеразная цепная реакция (расшифровка аббревиатуры ПЦР) с целью выявления HCV-инфекции является одной из составляющих общего скрининга, который в обязательном порядке назначается людям и больным при:

• беременности (исследование проводят несколько раз – при постановке на учет и в последнем триместре);
• донорстве крови и органов;
• у реципиентов перед и после переливания/трансплантации;
• работе, связанной с повышенным риском инфицирования;
• планировании хирургического вмешательства и других инвазивных манипуляций;
• поражении печени (анализ выполняют в ходе первичного обследования);
• проведении постоянных процедур гемодиализа;
• сопутствующем ВИЧ;
• онкологических заболеваниях;
• контакте с инфицированным человеком.

Проведение скрининга рекомендовано людям, употребляющим наркотические средства, предоставляющим сексуальные услуги, неразборчивым в половых связях. При этом такое же обследование необходимо пройти и их сожителям или постоянным партнерам. В обязательном порядке анализ на HCV показан детям, рожденным от инфицированных матерей. 

Сам возбудитель болезни представляет собой РНК-содержащий вирус, покрытый липидной оболочкой. За трансляцию генома «отвечает» терминальный участок, состоящий из порядка 340 нуклеотидных субъединиц. Его структурное строение схоже у 90% различных подтипов HCV. Именно он и является основной мишенью для проведения анализа на гепатит С методом ПЦР. 

Дополнительно состав вирусного генома представлен ядерным (core) и неструктурными (NS) участками. Первый регулирует репликацию возбудителя заболевания, а NS обеспечивают быстрое проникновение вируса в здоровую клетку. Зачастую на участке NS E2 отмечают вариабельность структуры, чем объясняют отсутствие должного иммунного ответа у некоторых пациентов, скрытое развитие патологии и склонность к хроническому течению (до 80% случаев). 

В связи с широким распространением гепатита С во многих клинических центрах проводятся бесплатные анализы. Предоставление результатов исследования является обязательным требованием для оформления санитарной книжки. 

Помимо подтверждения HCV-инфекции, современные методы диагностики позволяют оценить тяжесть течения заболевания, определить генотип вируса. Это влияет на схему терапии (подбор комбинации лекарственных препаратов, их дозировки, продолжительности приема) и прогноз патологии.

Какой анализ крови на гепатит С нужно сдавать?

Анализ крови на гепатит С можно сделать несколькими методиками, причем каждая отличается по информативности и надежности.

Все способы диагностических исследований можно разделить на несколько групп:

1. Серологические, способные обнаружить определенные антитела (иммуноглобулины), которые вырабатываются в организме в ответ на проникновение патогена, выполняется по методу ИФА либо иммуноблоттинга.
2. Молекулярные, направленные на определение РНК вируса гепатита С. Результаты исследования демонстрируют вирусологическую нагрузку, часто используются для контроля эффективности проводимой терапии, позволяют определить генотип HCV, что важно для подбора медикаментозного лечения. К данной группе диагностических тестов относят ПЦР, ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией (метод real time).
3. Генотипирование, назначается всем без исключения пациентам до начала приема противовирусных медикаментов. Необходимо для планирования продолжительности, иногда – для подбора дозировки лекарственной терапии.

В последнее время получает распространение анализ для определения генотипа пациента относительно интерлейкина IL28В. По данным клинических исследований, подобный тест позволяет прогнозировать время, необходимое для достижения устойчивого вирусологического ответа у пациентов с HCV I генотипа на фоне лечения ингибиторами протеаз первого поколения.

Проблемы, где сдать кровь на ПЦР или другие тесты для выявления HCV, в настоящее время нет. Срочный анализ можно сделать в платной лаборатории. В районных поликлиниках и больницах исследования выполняют в порядке очереди (за исключением проведения по строгим показаниям). 

У пациентов часто возникает вопрос, что такое ПЦР анализ при гепатите С, и чем он отличается от других способов диагностики? Данная методика заключается в воспроизведении множества копий ДНК на основе РНК вируса. Это самый точный анализ, позволяющей определить генотип патогена и его количественное содержание как в сыворотке крови, так и в биоптате тканей печени. 

Диагностика HCV-инфекции включает комплекс различных исследований. Биохимический анализ крови не может показать заражение. Отклонение результатов (уровня печеночных ферментов, билирубина и т.д.) от физиологических параметров свидетельствует о нарушении работы печени, и задача врача – установить причину подобной проблемы.

Для начала сдают ряд простых исследований, к числу которых относится:

• общий анализ крови (при HCV-инфекции возможно изменение уровня лейкоцитов, гемоглобина, количества форменных элементов крови и других показателей);
• биохимия (повышение концентрации печеночных ферментов, билирубина свидетельствует о тяжести поражения печени);
• тесты на сопутствующие инфекции (обязательно на ВИЧ, иногда – на некоторые венерические заболевания).

Для оценки общей клинической картины доктор выдает направления на анализ мочи, ультразвуковое обследование внутренних органов, рентгенографию или флюорографию грудной клетки. Другие диагностические процедуры делают по показаниям. 

Какие анализы на гепатит С необходимо сдавать для точного определения диагноза ? В соответствии с рекомендациями ВОЗ, диагностику HCV начинают с серологического исследования методом ИФА (при наличии выраженных отклонений в биохимии). Если данный тест покажет положительный результат, необходимо проведение дальнейшего обследования пациента. Помимо ПЦР и общеклинических анализов, назначают HBS ag HCV. Некоторые противовирусные препараты могут спровоцировать обострение гепатита В, поэтому перед началом лечения эту патологию необходимо исключить. 

Виды анализа ПЦР на гепатит С: количественный, качественный и генотипирование

Основным преимуществом ПЦР для определения HCV является возможность ранней диагностики (через 18–21 день после инфицирования). Выявление РНК вируса в крови позволяет однозначно трактовать неубедительные данные ИФА. Положительный результат служит однозначным показанием для дальнейшего обследования и назначения лечения, а отрицательный (при отклонениях от нормы анализов на биохимию) – поводом для повторного обследования через 3–4 недели. 

Существует несколько разновидностей ПЦР-диагностики HCV:

1. Качественный. Что показывает качественный анализ ПЦР на гепатит C? Проведение подобного исследования позволяет определить, заражен ли человек. Специалисты рекомендуют делать пробу ультрачувствительным методом (с восприимчивостью тест-систем не менее 10–50 МЕ/мл). Расшифровка результатов проста – положительный указывает на инфицирование и прогрессирующее распространение вируса в организме, отрицательный – или на отсутствие заболевания, или на ничтожно малую концентрацию возбудителя (вполне возможно, что иммунная система человека справится с патогеном самостоятельно). 
2. Количественный. Количественный анализ на гепатит С методом ПЦР (в отличие от качественного теста) позволяет количественно определить вирусную нагрузку, то есть уровень РНК HCV в объемной единице крови. Расшифровать результаты можно на основе диапазона нормы и патологических значений, измеряющихся в МЕ/мл. Положительной считается вирусная нагрузка выше 75 МЕ/мл. Количественное исследование будет отрицательным при значениях ниже 75 МЕ/мл. 
3. Генотипирование. Подобный анализ сдается при установленном диагнозе HCV-инфекции для разработки индивидуального подхода к пациенту. Проводится с помощью секвенирования и обратной гибридизации. Вирусная нагрузка может меняться на протяжении болезни, однако генотип остается прежним. 

Изучение различными методиками ПЦР показано на различных этапах диагностики и лечения гепатита С. Количественный повторяют чаще прочих для контроля эффективности противовирусной терапии.

Показания к исследованию

Основными показаниями к сдаче крови на гепатит С служат:

• беременность (показан плановый скрининг);
• профилактический осмотр у людей из группы риска (медицинские работники, волонтеры в наркологических центрах);
• ВИЧ;
• незащищенный половой контакт с инфицированным человеком;
• неразборчивые сексуальные связи.

С учетом высокой распространенности гепатита С специалисты рекомендуют проводить исследование с профилактической целью каждому человеку. Риск заражения присутствует при посещении стоматологического кабинета, маникюрного/педикюрного салона, где недобросовестно относятся к стерилизации инструментов и т.д. 

Строгим показанием к проведению анализов служит появление характерных и неспецифических симптомов гепатита С. К наиболее распространенным признакам относят:

• общую слабость;
• длительно сохраняющийся субфебрилитет на фоне отсутствия других инфекций;
• изменение цвета кала и/или мочи;
• тошноту, рвоту.

Желтушность слизистых оболочек и эпидермального покрова встречается редко. У 80% пациентов заболевание длительное время протекает бессимптомно, часто диагностируется случайно, в ходе плановой диспансеризации. 

Где сдать кровь

Выполнить анализ на гепатит С методом ПЦР можно практически в любой частной лаборатории или поликлинике по месту жительства. При госпитализации обследование делают в больнице в условиях стационара.

Преимуществами лабораторного центра служат:

1. Отсутствие необходимости в направлении от врача.
2. Короткие сроки выполнения исследования. Сколько делают анализ, скажет лаборант при оформлении заказа. Обычно это 1–2 дня. Некоторые лаборатории за отдельную плату предоставляют услуги проведения срочного исследования.
3. Сервис (отсутствие очередей, удобная оплата онлайн, получение результатов по электронной почте). 
4. Качество оборудования, на котором проводится исследование (для исключения ложноположительного анализа).

Однако без предварительной консультации врача сложно определить, какой именно вид ПЦР нужен. Также нельзя самостоятельно интерпретировать результаты. Некоторые лаборатории используют различные шкалы измерения вирусной нагрузки, что может стать причиной ошибки. Исследование методом полимеразной цепной реакции нередко является частью комплексного обследования, включающего как лабораторные, так и инструментальные тесты, которые дешевле выполнять в поликлинике по полису ОМС.

Как сдавать

На результаты может повлиять незнание правил, как сдавать кровь. Основной материал для ПЦР – сыворотка. Информативно исследование биоптата печени, однако инвазивная процедура не подходит для рутинного анализа. Как сдать кровь правильно?

Для получения достоверных результатов соблюдают следующие рекомендации:

1. Сдают кровь строго натощак: прием пищи исключается за 10–12 часов до процедуры. 
2. За 2–3 дня до анализа воздержаться от потребления алкоголя, «тяжелой» (жирной, жареной, соленой, копченой) пищи, приправ. 
3. Утром перед исследованием можно пить только воду (чай, кофе противопоказаны). 
4. За сутки ограничить тяжелую физическую активность.
5. За 10 часов до процедуры воздержаться от курения.

Забор крови осуществляется из вены. 

Необходимо проконсультироваться с врачом и поставить в известность специалиста, если пациент принимает какие-либо лекарственные препараты. По возможности, следует приостановить использование медикаментов за сутки до сдачи крови. 

Сколько делается качественный и количественный анализ?

Конкретные сроки выполнения анализа на HCV методом ПЦР зависят от загруженности лаборатории и наличия необходимого диагностического оборудования. Например, если материал транспортируют из пункта забора крови в лабораторный центр, время выполнения исследования увеличивается. 

Сколько в среднем делается анализ на гепатит С? В большинстве диагностических центров установлены следующие сроки для проведения исследования:

• качественное определение вируса – 1–4 дня;
• количественное выявление вирусной нагрузки методом ПЦР – 1–2 дней;
• генотипирование – 1–4 дня.

В поликлиниках данный срок может составлять до 7–10 дней. При выполнении исследования в частном лабораторном центре на руки выдается квитанция с кодом, по которому можно загрузить полученные результаты. Как правило, при готовности пациенту приходит сообщение с уведомлением. 

Расшифровка ПЦР

Данные лабораторного исследования выдаются пациенту в виде таблицы, где обязательно указаны следующие параметры:

• вид ПЦР (качественная, количественная или генотипирование);
• какие результаты анализов получены;
• референсные значения и расшифровка отклонения от нормы (данная графа может присутствовать не на всех бланках во избежание ошибочной диагностики и последующего самолечения).

Также указывают дату забора крови и выдачи результатов, координаты и печать лабораторного центра, ФИО и роспись медицинского работника, проводившего исследование. 

Расшифровка, т. е. что означает полученный результат, должна проводиться только квалифицированным врачом.

Данные, которые может показать исследование методом ПЦР, приведены в таблице ниже:

Вид ПЦР	Описание полученных значений
Качественный	В бланке указывают «обнаружено» или «не обнаружено»
Количественный	Показатели во многом зависят от чувствительности лабораторного оборудования Отрицательный (образцы РНК вируса gepatit C отсутствуют). Менее 600 МЕ – низкая вирусологическая нагрузка, прогноз при гепатите С благоприятный. 600–700 000 МЕ – умеренная вирусологическая нагрузка, требуется лечение, пациент заразен для окружающих. Более 700 000 МЕ – очень высокая вирусологическая нагрузка, прогноз неблагоприятен даже при проведении терапии, высока вероятность, что диагностируется хронический гепатит С.
Генотипирование	Проводится, если обнаружено присутствие вируса в организме. В бланке показывают выявленный подтип HCV

Расшифровкой результатов должен заниматься квалифицированный специалист. Так, иногда возникают ситуации, когда ИФА на гепатит С положительный, а ПЦР отрицательный. Подобное расхождение объясняют несколькими причинами. Это может быть ошибкой лаборатории, поэтому одно из исследований необходимо повторить спустя 2–3 недели. 

Иногда такие результаты возникают вследствие скрыто перенесенной острой HCV-инфекции. ИФА определяет наличие антител, но по факту, РНК вируса в организме или отсутствует, или не выявляется из-за ничтожно малой концентрации. В любом случае пациент с подобными данными исследований нуждается в дальнейшем наблюдении и консультациях врача.

Качественный анализ

Качественный анализ ПЦР является относительно быстрым и наиболее точным методом первичной диагностики гепатита С. По результатам исследования можно определить, заражен человек или нет, а затем проводить более детальные лабораторные методы. Ложноотрицательный результат вероятен в первые 14–21 день после заражения, когда количества РНК вируса недостаточно, для выявления даже высокочувствительными тест-системами. 

Ложноположительный результат возможен по вине сотрудников лаборатории. Иногда такие данные получают при беременности, активном течении онкологических и/или аутоиммунных заболеваний. 

Чтобы исключить вероятность неправильной расшифровки, качественный анализ рекомендуют повторить через 3–4 недели.

Количественный анализ

Количественный анализ методом ПЦР на гепатит С обычно назначают для определения вирусемии в ходе противовирусной терапии. В норме, по мере приема лекарственных средств вирусологическая нагрузка постепенно снижается. Цель лечения – отрицательные или минимально допустимые показатели исследования. 

Расшифровка результатов зависит от единиц измерения, используемых в лаборатории, поэтому обычно в бланке указывают полученные данные, референсные значения и описание отклонений от нормы. 

Количественный анализ ПЦР необходим для оценки эффективности лечения, подбора схемы терапии (сочетание нескольких противовирусных препаратов), определения продолжительности приема медикаментов. Исследование периодически проводится и после окончания курса лечения для своевременного выявления рецидива. 

Генотипирование

Одно из основных исследований, которые проводятся на этапе диагностики и обязательно до начала терапии, так как генотип – главный фактор, влияющий на подбор лекарственных средств.

К настоящему моменту известно об 6 генотипах HCV (каждый имеет свои подтипы), но в России и странах Европы у подавляющего числа больных выявляют:

• 1b – один из самых неблагоприятных в плане прогноза, быстро переходит в хроническую форму, агрессивен по отношению к тканям печени, сложно поддается терапии;
• 4 – плохо «отвечает» на терапию, требует тщательного подбора схемы приема препаратов;
• 2а, 3а – успешное лечение отмечают в 70% случаев и чаще (при использовании современных противовирусных медикаментов). 

Остальные генотипы диагностируют реже. В отличие от количественного анализа, генотипирование выполняют один раз и не повторяют в процессе лечения (исключение составляют устойчивые формы HCV, не поддающиеся терапии. 

Преимущества ПЦР диагностики

Несмотря на то, что ВОЗ рекомендует ИФА как основной метод выявления HCV-инфекции, исследование методом ПЦР имеет ряд «плюсов»:

• высокая точность;
• возможность первичной диагностики;
• оценка эффективности лечения по определению вирусологической нагрузки; 
• точное установление генотипа вируса, что предопределяет тактику дальнейшего лечения;
• доступная стоимость.

Пункты забора крови для проведения исследования есть в любом городе, что дополнительно облегчает диагностику и делает сдачу анализов доступными для каждого пациента.

Сколько стоит анализ

Стоимость анализа ПЦР на гепатит С зависит от ряда факторов:

1. Ценовая политика лабораторного центра и его местонахождение (так, в Москве подобные услуги обходятся дороже).
2. Разновидность исследования (цена на качественный, количественный анализ и генотипирование отличается).
3. Сроки выполнения (ряд лабораторий предлагают доплатить определенную сумму за срочное получение результатов).

Узнать, сколько стоит ПЦР на гепатит С можно либо по телефону, либо на интернет-сайте лаборатории.

Средняя цена по России составляет: 

• качественное определение РНК вируса – 700–1000 рублей и до 3000 рублей с использованием ультрачувствительных тест-систем;
• генотипирование – 1000–1200 рублей (в комплексе с количественным определением – до 4000 рублей);
• количественное определение вирусологической нагрузки – 2300–3000 рублей.

В поликлинике по месту жительства подобные исследования проводят бесплатно (при наличии полиса ОМС). Но лаборанту обязательно предъявляют направление от лечащего врача.