Как определяется вирусная нагрузка при гепатите С

Подозрение на HCV-инфекцию является показанием для прохождения большого количества различных инвазивных и неинвазивных исследований. Вирусная нагрузка при гепатите С – один из основных показателей, определяющих прогноз течения заболевания и схему лечения.

HCV отличается гемоконтактным механизмом передачи возбудителя. Вирус передается с кровью и другими биологическими жидкостями. При этом обязательными условиями служат повреждения эпидермального покрова и/или слизистых оболочек. 

Механизм заражения связан с искусственными (медицинские и немедицинские манипуляции) и естественными (вертикальный от матери к ребенку, половой и контактно-бытовой) путями передачи. Но в последние году существенно снизилась частота заражения гепатитом С при процедурах, проводимых в условиях государственных больниц и частных клиник. 

HCV-инфекция характеризуется полиморфизмом клинических проявлений. У многих пациентов болезнь протекает без каких-либо симптомов, частота хронизации достигает 83%. У 35% больных через несколько лет диагностирует цирроз, а у 40% – патология постепенно переходит в первичную гепатоцеллюлярную карциному. 

Ранее болезнь чаще диагностировали у относительно молодых людей 20–29 лет, в настоящее время средний возраст пациентов – 30–39 лет.

К группе особенно высокого риска инфицирования относят:

• лиц с пристрастием к наркотическим инъекционным препаратам;
• медицинских работников и косметологов, постоянно контактирующих с кровью;
• детей, родившихся от матерей, зараженных какой-либо формой гепатита С;
• членов семей инфицированных;
• пациентов стационаров, получающие множественные внутривенные манипуляции;
• лиц, занимающиеся коммерческим сексом.

С момента открытия в середине 1970-х годов HCV называли вирусным гепатитом ни-А, ни-В. В 1977 г. патология была включена в номенклатуру вирусных гепатитов. Применение новых молекулярных методик позволило в 1988 году выделить и клонировать геном HCV. В этом же году обнаружили два основных структурных белка NS3 и NS4. Впоследствии на их основе были созданы тест-системы, функционирующие по принципу радиоиммунного и иммуноферментного анализа. В 1990 году Э.Уайнер разработал метод качественной и количественной идентификации генома вируса в сыворотке крови на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). 

Специалисты до сих пор не могут окончательно определить механизм повреждения и последующей гибели гепатоцитов. Некоторые придерживаются теории, что некроз клеток обусловлен репликацией вирусной инфекции, другие считают данный процесс следствием иммунного ответа на проникновение патогена. Вполне вероятно сочетание этих двух механизмов.

До того, как РНК вируса возможно количественно выделить методом ПЦР, патоген в своем развитии проходит несколько этапов. Это:

• прикрепление HCV к наружной мембране клетки печени;
• проникновение вируса внутрь клетки (предполагают, что это происходит из-за связи липопротеинов клеточной оболочки и субъединицы Е2 HCV);
• высвобождение РНК в цитоплазму клетки;
• трансляция РНК, формирование репликативного комплекса и прикрепление его на внутреннюю поверхность клеточной мембраны;
• синтез новых цепей РНК и патогенных белков, служащих основой для сборки вируса;
• выход вириона из клетки и поражение соседних структур. 

Интенсивность этого процесса напрямую влияет на течение заболевания, вероятность сопутствующих поражений печени и их тяжесть, успех и прогноз противовирусной терапии.

Что такое вирусная нагрузка?

Процесс репликации РНК происходит непрерывно, и концентрация вирусных частиц в организме человека постоянно растет. Уровень копий HCV в крови (для удобства эту цифру обозначают в 1 мл) и называют вирусной нагрузкой (ВН). При правильном подборе лечения количество вируса гепатита С в крови постепенно снижается. Терапию считают удачной, если как в процессе приема определенных медикаментов, так и спустя полгода после его окончания вирусологическая (вирусная) нагрузка отрицательна , то есть РНК HCV в крови не обнаруживается.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ, начинают диагностику HCV с анализа методом ИФА. Иммуноферментный способ выявления вируса широко используется для определения времени инфицирования и фазы течения инфекции (острая, хроническая либо период обострения). Но из-за особенностей функционирования иммунной системы человека, на протяжении 3–6 месяцев наблюдают так называемое «серологическое окно» – время, когда антитела к HCV в крови не обнаруживаются. 

Полимеразная цепная реакция позволяет сократить этот срок как минимум вдвое. Методом ПЦР вирус в крови можно выявить гораздо раньше – при использовании современных высокочувствительных тест-систем через 2–3 недели с момента заражения.

Определение показателей количества вирусной нагрузки проводят несколько раз. Первый анализ необходим перед началом терапии. С одной стороны, исследование служит косвенным подтверждением результатов предшествующей качественной ПЦР и ИФА. А с другой, позволяет врачу оценить тяжесть течения заболевания и степень риска развития внепеченочных и печеночных осложнений. 

Вирусную нагрузку определяют и в процессе терапии (на 28 день и по окончании). Контрольное исследование делают через 24 и 48 недель после приема последней таблетки противовирусного лекарственного средства. Для удобства расшифровки концентрацию РНК указывают в малом объеме крови – 1 мл. Вирусологическую нагрузку обозначают как МЕ либо число копий. 

Во избежание путаницы и неверной трактовки результатов исследований, обращают внимание на референсные значения, указанные в бланке анализа. Нормы для концентрации HCV, измеряемой в МЕ/мл и копий/мл существенно отличаются. 

В зависимости от общего количества вирионов, вирусологическая нагрузка бывает:

• отрицательная, когда РНК HCV не обнаруживается;
• низкая;
• умеренная;
• высокая. 

Какая вирусная нагрузка при гепатите С? На этот вопрос может ответить только врач в каждом конкретном случае. Можно предварительно обсудить результаты на специализированном форуме, однако окончательный вердикт выносит доктор. Данная характеристика необходима для определения точной тактики ведения пациента. При низкой или умеренной физической нагрузке прописывают стандартные протоколы лечения, при высокой показаны многокомпонентные медикаменты с обязательным контролем функции печени. 

Какие анализы определяют

Многие пациенты задают вопрос, как узнать вирусную нагрузку и посчитать точное количество копий HCV. Это возможно только при постановке ПЦР. Данная методика позволяет выявить РНК гепатита С в организме человека, точно оценить его концентрацию. Также ПЦР позволяет врачу установить генотип вируса, что также является одним из основных критериев подбора методики лечения. 

Анализ на вирусную нагрузку при гепатите С проводится в клинической лаборатории с использованием определенных тест-систем. Современные наборы отличаются не только специфичностью, но и высокой чувствительностью. Поэтому перед сдачей анализа (особенно при подозрении на раннее инфицирование либо при контроле эффективности лечения) необходимо поинтересоваться, какое оборудование применяют для оценки результатов.

Характеристика чувствительности диагностических методов

Перечень тест-систем с их характеристиками приведен в схеме:

Как определить вирусную нагрузку при гепатите С? Для этого пациенту необходимо обратиться в государственную или частную лабораторию и сдать кровь на количественную ПЦР. Нередко анализ выполняют в комплексе с генотипированием (целесообразно проводить при первичной диагностике). 

Существует несколько методик проведения ПЦР, каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки.

Их перечень приведен в таблице:

Название способа ПЦР	Описание реакции
Обратная транскрипция (ОТ)	одна из первых методик ПЦР, применяется с 1990 года; наработка копий ДНК осуществляется при помощи ДНК-зависимой ДНК-полимеразы, полученной из определенного вида бактерий; чувствительность метода невысока (от 100 МЕ/мл, но этот параметр можно повысить при помощи модификации ОТ ПЦР – «гнездового» (nested) способа постановки реакции
Лигазная ПЦР	Методика отличается высокой чувствительностью. По такому принципу «работает» тест-система Abbott Real Time
Транскрипционно-опосредованная амплификация	Подобный способ количественного определения копий вируса используется в наборах Versant HCV RNA Qualitative Assay от Bayer Diagnostics. Характеризуется: очень высокой чувствительностью – 50 копий/мл; скоростью выполнения (для получения первых результатов требуется 30–40 минут)
Метод гибридизации с использованием разветвленных зондов	По такому принципу функционирует диагностическая система Versant HCV RNA 3.0, Bayer Diagnostics. Проводится в 96-луночных планшетах. Методика практически не применяется из-за низкой чувствительности (определяется от 2500 копий/мл). Однако в некоторых случаях исследование проводят для обнаружения вируса непосредственно в клетках печени

Обычно доктора знают все характеристики применяемых в лабораториях тест-систем. Чувствительность используемых диагностических наборов важна не только для количественного, но и для качественного определения РНК HCV. Выявление даже незначительной концентрации гепатита С позволяет провести диагностику в кратчайшие сроки после инфицирования. Впоследствии высокочувствительные количественные тест-системы способствуют более эффективному контролю проводимого лечения.

В каких случаях нужно делать исследование

Количественный анализ содержания вируса в организме человека методом полимеразной цепной реакции не назначается в качестве первого диагностического теста. Причинами подобного поэтапного выявления гепатита С служит необходимость многократного подтверждения результатов.

Показаниями к началу процесса определения HCV являются:

• появление характерных для вирусной инфекции симптомов (слабости, нарушений пищеварения и т.д.);
• отклонение от нормы в показателях печеночных проб;
• профилактическая проверка (рекомендуют проводить ежегодно по собственному желанию или оформлении медицинских документов для работы).

Основные стадии диагностики вирусного гепатита С, предшествующие назначению количественного определения РНК методом полимеразной цепной реакции представлена на схеме.

Проведение исследования методом количественной ПЦР является обязательным условием контроля эффективности приема противовирусных медикаментов. Первый анализ сдают на 4 неделе лечения, затем на 12 и на 24 (если курс длится полгода). Повторно вирусную нагрузку проверяют через 12, затем через 24 и 48 недель после окончания терапии. 

Отсутствие копий вируса в образце крови при первом исследовании называют устойчивым вирусологическим ответом (сокращенно, УВО), что означает хороший ответ на терапию и благоприятный прогноз излечения. Концентрация РНК HCV, не определяемая количественной ПЦР при последнем анализе, свидетельствует о полной эрадикации вируса, после таких результатов (а также их повторной проверки), врач сообщает пациенту, что он здоров.

Возможные показатели в результатах анализов и их расшифровка

Если определяется вирусная нагрузка при гепатите С, расшифровка полученных данных должна проводиться профильным специалистом (гепатологом или инфекционистом). По мнению докторов, процесс диагностики HCV напоминает логическую математическую цепочку: результат одного анализа служит основанием для определения типа последующего исследования. 

Пациенту следует как можно больше знать о собственном диагнозе, но не заниматься самолечением. Это необходимо для понимания важности и целесообразности терапии и предупреждения распространения инфекции на других людей. 

Примерная расшифровка результатов количественной ПЦР с указанием нормы и градации в зависимости от референсных показателей представлена в таблице:

Показатели исследования	Особенности расшифровки
Копии РНК (RNA HCV) не обнаружены	Человек здоров либо с момента заражения произошло недостаточно времени для репликации вируса в количестве, определяемом в ходе анализа
800 МЕ/мл либо 200ˑ104 копий/мл или ниже	Низкая степень ВН
Выше 800 МЕ/мл или 20 000ˑ102 копий/мл	Высокий уровень ВН

Норма

Если РНК вируса в крови не обнаружены, человек скорее всего здоров. Однако ПЦР может определить HCV только спустя 2–3 недели, иногда – через 2–3 месяца после заражения. Поэтому при сомнительных результатах ИФА следует повторить исследование. Норма при постановке ПЦР на фоне противовирусной терапии или после ее окончания свидетельствует о ее эффективности. 

Высокая

Достаточно опасный показатель. Свидетельствует о неблагоприятном течении вирусного гепатита С, высоком риске тяжелых осложнений (цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы). Человек с высокой ВН опасен и для окружающих. Возрастает риск заражения при половых контактах, поцелуях и контактно-бытовыми способами. При подобных результатах доктор часто назначает пролонгированный курс терапии (на 24 недели), дополняет его различными препаратами.

Низкая

Низкая вирусная нагрузка – признак или недавнего заражения, или латентного течения инфекции. Риск передачи заболевания невысок, за исключением прямого гемоконтакта. Прогноз терапии благоприятен при соблюдении рекомендаций врача и отсутствии тяжелых поражений клеток печени.

Как снизить высокую вирусную нагрузку

Только у 15–17% пациентов наступает самостоятельное излечение острой формы вируса без медикаментозной терапии. Но в подавляющем большинстве случаев болезнь переходит в хроническое течение, что требует приема определенных лекарственных препаратов.

Обычно доктора назначают:

• Даклатасвир;
• Софосбувир;
• Ледипасвир;
• Асунапревир и др. 

Медикаментозное лечение – единственный способ быстро снизить ВН и полностью избавиться от патологии. 

Но наравне с приемом предписанных врачом медикаментов необходимо соблюдение диеты с исключением вредных для печени блюд и продуктов. Категорически противопоказан алкоголь. Рекомендуют отказаться от пристрастия к никотину. Также терапия может не оказать должного результата при употреблении наркотиков. 

Разнообразные народные средства, рецепты нетрадиционной медицины на основе трав, продуктов пчеловодства и т.д. могут применяться лишь как дополнение к основной медикаментозной терапии.